内容简介
NY/T 3855-2021小麦孢囊线虫检测技术规程
Technical code of practice for detection of wheat cyst nematodes
2021-11-01 实施
2021-05-07发布
4.1.8 核酸染料。
4.2 主要设备
4.2.1 标准网筛∶孔径分别为0.025 mm、0.18 mm和0.85 mm。
4.2.2 生物显微镜∶40倍～1 000倍。
4.2.3 体视显微镜∶10倍~120倍。
4.2.4 可调量程移液器∶2.5μL、10 μ、100 μL、200 μl.和1000μ1.
4.2.5 凝胶成像系统。
4.2.6 电泳仪。
4.2.7 水平电泳槽。
4.2.8 高速台式离心机。
4.2.9 PCR仪。
5 样本采集和分离
5. 样本采集
按NY/T3533的规定执行。
5.2 线由分离
分离样晶中的二龄幼虫和孢囊。分离方法参见NY/T353—2020中附录B。
6 分子检测
6.1 线虫 DNA提取
按附录A 的规定执行。
6.2 检测方法
6.2.1 方法
采用常规 PCR技术。
6.2.2 引
禾谷孢囊线虫的正向引物 HaF1为5°TGACGAGAACATNTGATGGGGATGAT3'.反向引物HaR1 为5'-GAGGGTGAATGAAATGAT-3'。
非利普孢囊线虫的正向引物 HF1 为5'CAGGACGAAACTCATTCAACCAA3'.反向引物HRI 为5'-AGGGCCGAACAGGAGAAGATTAGA-3'。
引物溶液浓度均为10 μmol/L.。
6.3 反应体系
在设定的PCR管中加人 10×PR缓冲液2.5glTag DNA 聚合酶α.5μl正向引物和反向引物各0.5以dNTP%2μ待测样品的DNA模板1μ用d HO补至25 μ。阴性对照用dd H-O代替DNA模板。