SC/T 7238-2020
对虾偷死野田村病毒（CMNV）检测方法
Detection methods for covert mortality nodavirus(CMNV)
2021-01-01实施
2020-08-26发布
1 范围
本标准给出了对虾偷死野田村病毒（CMNV）逆转录套式 PCR 检测、逆转录环介导等温扩增检测、TagMan荧光定量 RTPCR 检测所需的试剂和材料、器材和设备，规定了操作步骤和结果判定的要求。
本标准适用于CMNV的检测和监测。
2 规范性引用文件
4.9 空白对照∶可用RNase 【ree 水作为空白对照。
4.10 dNTP（各2.5mmol/L）;含dATP、dTIP、dGTP、dCTP各2.5 mmol/L的混合物，—20℃保存。
4.11 dNTP（各10 mmol/L）;含dATP、dTTP、dGTP、dCTP各10 mmol/L.的混合物，—20℃保存。
4.12 dNTP（各20 mmol/L）∶含dATP、dTTP、dCTP、dGTP各20mmol/L见A.2，-20℃保存。
4.13 M-MLV逆转录酶（200 U/μl）∶商品化试剂，—20℃保存，或其他等效逆转录酶。
4.14 5×M-ML.V逆转录酶缓冲液∶商品化试剂，一20℃保存，或其他等效缓冲液。
4.15 Tag DNA聚合酶（5 U/μL.）∶商品化试剂，—20℃保存，或其他等效DNA 聚合酶。
4.16 10×PCR缓冲液;商品化试剂，随Tag DNA聚合酶提供;不含 Mg!，一20℃保存，或其等效缓冲液。
4.17 MgCl（25 mmol/L）∶-20℃保存。
4.18 琼脂糖∶电泳级。
4.19 6×载样缓冲液∶商品化试剂，或其他等效载样缓冲液。
4.20 DNA Marker∶商品化试剂，—20℃保存，或其他等效 Marker。
4.21 电泳核酸染料∶生化制剂。
4.22 10×Isothermal Amplification Buffer∶商品化产品，稀释为1×工作液时内含 20 mmol/L，Tris HCl，50 mmol/L. KCI，10 mmol/L（NH，）SO，2 mmol/L. MgSO，0.1%Tween 20;或其他等效试剂。
4.23 Bst DNA聚合酶;商品化试剂，酶浓度8 U/μl—20℃保存，或其他等效聚合酶。
4.24 甜菜碱（Betaine）;浓度5 mol/L，见 A.3，一20℃保存。
4.25 硫酸镁（MgSO）∶浓度100 mmol/L20℃保存。
4.26 荧光定量 PCR核酸染料∶20×Eva Green.商品化试剂，4℃保存，或其他等效核酸染料。
4.27 10×qRT-PCR缓冲液∶商品化试剂，随qRT-PCR的Tag DNA聚合酶提供，不含 Mg ，-20℃保存，或其他等效缓冲液。
4.28 荧光定量PCR Taq DNA聚合酶（5 U/μL）∶适用于qRT-PCR，一20℃保存。
4.29 检测方法的引物和探针序列参见附录 B.按各方法中的工作浓度配制，一20℃保存。
5 器材和设备