ICS 65.020.20
CCS B 05 DB4419
东
莞 市 地 方 标 准
DB 4419/T 15—2024
朱顶红种苗组培快繁技术规程
Technical regulations for production of tissue culture plantlets of Hippeastrum
2024 – 10 – 10 发布 2024 – 11 – 01 实施
东莞市市场监督管理局 发 布
DB4419/T 15—2024
目 次
前 言...............................................................................................................................................................III
1
范围...................................................................................................................................................................1
2
规范性引用文件.............................................................................................................................................. 1
3
术语与定义...................................................................................................................................................... 1
4
培养基.............................................................................................................................................................. 3
4.1
初代培养基...............................................................................................................................................3
4.2
增殖培养基...............................................................................................................................................3
4.3
愈伤组织分化培养基...............................................................................................................................3
4.4
体细胞胚成苗培养基...............................................................................................................................3
4.5
壮苗培养基...............................................................................................................................................3
4.6
生根培养基...............................................................................................................................................3
5
组培苗快繁流程.............................................................................................................................................. 3
5.1
培养基配制...............................................................................................................................................3
5.2
培养基灭菌...............................................................................................................................................3
5.3
接种工具灭菌...........................................................................................................................................3
5.4
环境消毒...................................................................................................................................................4
5.5
无菌操作...................................................................................................................................................4
5.6
外植体选择...............................................................................................................................................4
5.7
外植体消毒...............................................................................................................................................4
5.8
初代培养...................................................................................................................................................4
5.8.1
以鳞茎盘为外植体诱导不定芽....................................................................................................... 4
5.8.2
以鳞片为外植体诱导胚性愈伤组织............................................................................................... 4
5.8.3
以子房和花梗为外植体诱导不定芽............................................................................................... 4
5.9
增殖培养...................................................................................................................................................4
5.9.1
不定芽增殖培养................................................................................................................................4
5.9.2
愈伤组织增殖培养............................................................................................................................5
5.9.3
愈伤组织分化培养............................................................................................................................5
5.9.4
愈伤组织体细胞胚的诱导............................................................................................................... 5
5.10
体细胞胚的培养.....................................................................................................................................5
5.11
壮苗培养.................................................................................................................................................5
5.12
生根培养.................................................................................................................................................5
5.13
炼苗.........................................................................................................................................................5
5.14
移栽.........................................................................................................................................................5
6
组培苗质量及分级.......................................................................................................................................... 5
6.1
质量要求...................................................................................................................................................5
I
DB4419/T 15—2024
6.2
分级...........................................................................................................................................................6
II
DB4419/T 15—2024
前 言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起
草。
本文件由东莞市农业农村局提出。
本文件由东莞市农业农村局归口。
本文件起草单位：广东圣茵花卉园艺有限公司、中国科学院华南植物园。
本文件起草人：张文心、曾晶珏、曹雪莹、曾宋君、周世明、吴坤林、裴洁、房林。
本文件为首次发布。
III
DB4419/T 15—2024
朱顶红种苗组培快繁技术规程
1
范围
本文件规定了朱顶红种苗组培快繁的术语和定义、培养基、组培苗快繁流程、组培苗质量及分级。
本文件适用于朱顶红种苗的组培快繁。
2
规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文
件。
GB/T 6001
育苗技术规程
NY/T 2306
花卉种苗组培快繁技术规程
危险化学品安全管理条例
中华人民共和国国务院令第591号
3
术语与定义
下列术语与定义适用于本文件。
3.1
朱顶红 hippeastrum
朱顶红是石蒜科（amaryllidaceae）朱顶红属（hippeastrum herb.）多年生球根花卉的总称，包括原
生种和园艺品种，其鳞茎膨大成卵状球形，由鳞茎盘和鳞片组成；叶带状，互生成两侧排列；花茎中空，
从鳞茎一侧或两侧抽生；伞形花序两朵至多朵着生于花茎顶端；花漏斗形，单瓣或重瓣，单瓣花花瓣和
雄蕊都为6枚，雌蕊1枚，可育；重瓣花为雌雄蕊退化而成，多不可育，花瓣颜色多变，部分品种带有香
味；子房3室，蒴果球形；种子成熟后为黑色扁平翅状。
3.2
组培 tissue culture
植物组织培养的简称，将植物的器官、组织、细胞或原生质体等材料，在人工配制的培养基上和特
定环境条件下离体培养，获得再生完整植株的过程。
3.3
培养基 medium
在植物组织培养过程中，根据不同植物营养需求、人工配制的、包含培养材料生长所需的营养物质
和生长调节物质、供培养材料生长的基质。
1
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3.4
接种 inoculation
将消毒后的外植体或干净培养材料在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。
3.5
初代培养 primary culture
无菌条件下将表面消毒的外植体切割成适合大小，接入经灭菌处理的培养基中进行初代诱导培养。
初代培养时间一般为3～5周。为最大限度保持母本特性，宜以直接诱导不定芽为主。
3.6
增值培养 proliferation culture
经诱导形成的不定芽不断转移到增值培养基中进行培养。增值周期根据培养植物材料生长情况而
定，一般为3周～6周。初代要培养以后培养代数宜控制在12～30代，增值系数宜控制在2.5～4.0。
3.7
生根培养 rooting cultue
从增值培养或壮苗培养的不定芽中切取生长健壮、叶色正常、叶片舒展的不定芽，接种在生根培养
基中诱导生根，培养周期一般为3周～4周。幼苗基部长出3条～5条1 cm～2 cm长的不定根即可进行移栽。
3.8
炼苗和移栽 refining and transplanting
组培苗按照5.13、5.14的练苗和移栽方法将组培苗移入温室中炼苗并随后种植于配有专用基质的穴
盘中。
3.9
MS 培养基
Murashige和Skoog于1962年设计的，植物组织培养中广泛应用的培养基。
3.10
6-苄氨基腺嘌呤（6-BA ） 6-benzyl aminopurin
配制方法按照 NY/T 2306 执行。
3.11
NAA：萘乙酸 naphthylacetic acid
配制方法按照 NY/T 2306 执行。
3.12
IBA：吲哚丁酸 indole-3-butyric acid
2
DB4419/T 15—2024
配制方法按照 NY/T 2306 执行。
4 培养基
4.1 初代培养基
4.1.1 以切割的鳞片为外植体诱导不定芽：MS + 6-BA 4.0 mg/L～5.0 mg/L + 3% 蔗糖+ 0.5% 琼脂，pH
5.8～6.0。
4.1.2
以鳞片为外植体诱导胚性愈伤组织：MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 1.0 mg/L + TDZ 2.0 mg/L + 3%
蔗糖 + 0.5% 琼脂，pH 5.8～6.0。
4.1.3
以子房和花梗为外植体诱导不定芽：1/2MS + 6-BA 4.0 mg/L + NAA 0.5 mg/L+活性炭 0.5 g/L + 3%
蔗糖 + 0.5% 琼脂，pH 5.8～6.0。
4.2
增殖培养基
4.2.1
不定芽增殖培养基：MS + 6-BA 4.0mg/L + 3% 蔗糖 + 0.5% 琼脂，pH 5.8～6.0。
4.2.2
愈伤组织增殖培养基：MS + 6-BA 2.0mg/L + NAA 1.0mg/L + TDZ 2.0mg/L + 3% 蔗糖 + 0.5% 琼
脂，pH 5.8～6.0。
4.3
愈伤组织分化培养基
MS + 6-BA 2.0mg/L + NAA 1.0mg/L + TDZ 2.0mg/L + 3% 蔗糖 + 0.5% 琼脂，pH 5.8～6.0。
4.4
体细胞胚成苗培养基
MS + 3% 蔗糖 + 0.5% 琼脂，pH 5.8～6.0。
4.5
壮苗培养基
MS + 6-BA 0.5mg/L + 3% 蔗糖 + 0.5% 琼脂，pH 5.8～6.0。
4.6
生根培养基
MS + IBA 2.0mg/L或MS + NAA 1.0mg/L，3% 蔗糖，0.5% 琼脂，pH 5.8～6.0。
5
组培苗快繁流程
5.1
培养基配制
按培养基的配方及所需的数量，将所需的各类物质分别加入蒸馏水中，搅拌溶化后定容至所需的体
积，用1 N的HCl溶液或1 N的NaOH溶液调节pH值至5.8～6.0后，将100 ml左右的培养基分装入培养瓶（Φ
10cm，h14cm）中，盖上带透气膜（Φ0.5mm）的塑料盖。
5.2
培养基灭菌
采用湿热灭菌法，灭菌锅压力0.11Mpa、温度121 ℃，灭菌时间18min～20min。
5.3
接种工具灭菌
3
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镊子、手术刀柄、接种盘等接种工具使用前，采用湿热灭菌法，灭菌锅压力0.11 Mpa、温度121 ℃，
灭菌时间18min～20min。使用过程中，镊子与手术刀片可采用酒精灯灼烧或用接种专用消毒器灭菌。
5.4
环境消毒
培养室和接种室每周定期用二氧化氯消毒剂或臭氧杀菌，接种前接种台用紫外线灯照射30 min后再
用浓度为75%的酒精喷雾杀菌。
5.5
无菌操作
操作人员接种时应佩戴乳胶手套，并用70%～75%酒精涂擦。
5.6
外植体选择
选择具有典型性状的健壮、无病虫害的植株，采切鳞茎或花序作为建立组培快繁体系的外植体，采
切前适当控水控肥，在室外采种时，应选择晴朗天气，确保外植体干爽。
5.7
外植体消毒
用棉花球蘸取75%酒精，擦去表面尘土，鳞茎去除根、叶，剥除外部1～3层鳞片，放入无菌锥形瓶
中。先倒入75%酒精使之没过外植体表面1cm左右，轻摇锥形瓶，除去外植体表面气泡，消毒30s后倒
掉酒精；再用0.1%升汞溶液浸泡8min～10min或1%次氯酸钠溶液浸泡10min～20min，中途摇晃瓶子，
使外植体与试剂充分接触；最后用无菌水冲洗5次～6次。升汞安全管理方法按照《危险化学品安全管理
条例》执行。
5.8
初代培养
5.8.1
以鳞茎盘为外植体诱导不定芽
将已消毒的鳞茎置于无菌垫盘上，从中间横切，保留中下部位，再根据鳞茎大小按需切成带有鳞茎
盘的小块接种到初代培养基（见4.1.1）中，进行初代诱导培养，鳞茎盘一端朝下。培养条件为：温度25 ℃
±2 ℃，光照强度2500Lux～3000Lux，光照时间12h/d。
5.8.2
以鳞片为外植体诱导胚性愈伤组织
将已消毒的鳞茎置于无菌垫盘上，从中间横切，保留中下部位，将鳞片切成5mm×6mm的切块，将
鳞片切块凹面向下放置在初代培养基（见4.1.2）上，培养条件为：温度25 ℃±2 ℃，光照强度2500 Lux～
3000 Lux，光照时间12h/d。
5.8.3
以子房和花梗为外植体诱导不定芽
将已消毒的花蕾置于无菌垫盘上，将花梗和子房横切成2 mm～3 mm的薄片，平铺在初代培养基（见
4.1.3）上，进行初代诱导培养。培养温度为25 ℃±2 ℃，暗培养48 h后，进行光照培养，光照强度1500
Lux，光照时间16h/d。
5.9
增殖培养
5.9.1
不定芽增殖培养
4
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将诱导培养形成不定芽的培养材料切分成小丛芽，转接到增殖培养基（见4.2.1）中继续培养。若培
养材料已形成鳞茎，则视鳞茎大小将其纵切成2份～4份，再接种到增殖培养基中，增殖周期一般为30 d～
45d。培养条件为：温度25 ℃±2 ℃，光照强度2000Lux～2500Lux，光照时间12h/d。
5.9.2
愈伤组织增殖培养
将诱导培养形成的愈伤组织切分成3 mm～5 mm的小块，转接到增殖培养基（见4.2.2）中进行培养。
培养周期30 d～45 d。培养条件为：温度25 ℃±2 ℃，光照强度1500 Lux～2000 Lux，光照时间12 h/d。
5.9.3
愈伤组织分化培养
将3mm～5mm的愈伤组织，转接到愈伤组织分化培养基（见4.3）中，培养周期30d～60d，培养条
件为：温度25 ℃±2 ℃，光照强度2000Lux～2500Lux，光照时间12h/d。
5.9.4
愈伤组织体细胞胚的诱导
将3mm～5mm的愈伤组织，接种到愈伤组织分化培养基（见4.3）中，每30d增殖1次，次数控制在
10次以内，培养条件为：温度25 ℃±2 ℃，光照强度1500Lux～2000Lux，光照时间12h/d。
5.10
体细胞胚的培养
剥取单个体细胞胚，接种到体细胞胚成苗培养基（见4.4）上，培养周期60d，培养条件为：温度25 ℃
±2 ℃，光照强度1500Lux～2000Lux，光照时间12h/d。
5.11
壮苗培养
将不定芽切分成单株，接种到壮苗培养基（见4.5）中，培养周期60d，培养条件为：温度25 ℃±2 ℃，
光照强度2000Lux～2500Lux，光照时间12h/d。
5.12
生根培养
将带有2片～3片叶的不定芽按大小分开，分别接种到生根培养基（见4.6）中，每瓶接种15株～20
株，培养周期30d～45d，培养条件为：温度25 ℃±2 ℃，光照强度2000Lux～2500Lux，光照时间12h/d。
5.13
炼苗
将具有2条～3条不定根、鳞茎直径0.5cm～1.0 cm的组培瓶苗移入炼苗室，炼苗室要求环境清洁、
具散射光，光照强度5000Lux～10000Lux，温度20 ℃～32 ℃，炼苗周期5d～10d。
5.14
移栽
炼苗后，取出组培苗，用清水洗净表面的培养基后，放入1000倍多菌灵浸泡1 min～2 min，捞出沥
干水分，分级移栽于穴盘或育苗筛中。采用泥炭和珍珠岩体积比为3:1的湿润混合基质，种植时尽量避
免折断根系，将根部舒展铺于基质上，填充基质至高于根系2 cm～3 cm处，轻压基质，露出鳞茎顶端及
叶片。移栽后无需浇定根水，7d～10d后再进行常规的种植管理。
6
组培苗质量及分级
6.1
质量要求
品种纯正，生长健壮，不徒长，无污染，根系生长良好，无可见变异情况。
5
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6.2
分级
组培苗分级按表1分级。
表 1
朱顶红组培苗分级
组培苗 等级 叶片 根 鳞茎
叶长（cm） 叶宽（cm） 叶片数（片） 根数（条） 根长（cm） 直径（cm）
1 级 ＞4.0 ＞0.7 ＞3 ＞3 ＞3 ＞0.5
2 级 0.5～0.4 0.3～0.7 1～2 2～3 1～3 ≤0.5
_________________________________
6