ICS 71.040.30 G 66
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T32226—2015
果糖二磷酸钠（FDP)含量测定用固体复合酶（ALD、TIM、GDH)试剂
Specific solid enzyme (ALD, TIM, GDH)reagent for
determination of fructose diphosphate(FDP)
2016-07-01实施
2015-12-10发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布 GB/T 32226—2015
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387)提出并归口。 本标准起草单位：中国测试技术研究院、北京众宜隆润科技有限公司。 本标准起草人：谭和平、赵军、周李华、张莉莉、孙登峰、王晓平、叶德萍。
1 GB/T322262015
果糖二磷酸钠（FDP）含量测定用固体复合酶（ALD、TIM、GDH）试剂
1范围
本标准规定了果糖二磷酸钠（FDP)含量测定用固体复合酶（ALD、TIM、GDH)试剂的技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装和贮存。
本标准适用于果糖二磷酸钠（FDP)含量测定用固体复合酶（ALD、TIM、GDH)试剂。
2规范性引用文件
1
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682 2分析实验室用水规格和试验方法 GB/T9721化学试剂分子吸收分光光度法通则（紫外和可见光部分） GB15346 化学试剂包装及标志 GB19489 实验室生物安全通用要求 HG/T3921 化学试剂采样及验收规则 JJF1070 定量包装商品净含量计量检验规则
术语、定义和缩略语
3
3.1术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1
固体复合酶 solidenzyme 果糖二磷酸钠含量测定用的复合酶试剂，含醛缩酶（ALD）、磷酸丙糖异构酶（TIM)和甘油磷酸脱
氢酶(GDH)的复合酶试剂。 3.1.2
固体复合酶活力 solidenzymeactivity 室温下，1mg酶在1min内催化果糖二磷酸钠（FDP）的质量（μg），用μg/（min·mg）表示。
3.2 2缩略语
下列缩略语适用于本文件。 ALD：醛缩酶 ALD、TIM、GDH：固体复合酶 DAN：氧化型辅酶I FDP：果糖二磷酸钠 GDH：甘油磷酸脱氢酶 NADH：还原辅酶I
1 GB/T32226—2015
TIM：磷酸丙糖异构酶
4技术要求
4.1组成
本固体复合酶由醛缩酶（ALD)、磷酸丙糖异构酶（TIM）、甘油磷酸脱氢酶（GDH)组成。各组分的重量份是：ALD(醛缩酶）20%～25%，TIM（磷酸丙糖异构酶）30%～40%，GDH（甘油磷酸脱氢酶） 30%~35%。
4.2感官要求
本品为浅红色或类白色冻干粉，溶于三羟甲基氨基甲烷溶液（0.1mol/L，pH7.6）。 4.3理化要求
固体酶活力不小于40μg/（min·mg）。 4.4卫生要求
符合GB19489的要求。
5试验方法
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的三级（含三级）以上的水。 5.1外观
肉眼观察为浅红色或类白色冻干粉。
5.2固体复合酶活力的测定 5.2.1原理
本产品是以动物肌肉为主要原料生产的含ALD、TIM和GDH的复合酶试剂。FDP在NADH的存在下，先后经ALD、TIM和GDH的作用，一分子FDP能使两分子NADH氧化成DAN，引起 NADH反应前后在340nm处吸光度发生变化，在线性范围内，通过测定NADH在单位时间内产生的吸光度变化值，可计算固体复合酶的活力。 5.2.2试剂和溶液 5.2.2.1盐酸三乙醇胺缓冲液（0.4mol/LpH7.6）：取盐酸三乙醇胺18.6g，加水200mL溶解，加 3.7g乙二胺四乙酸二钠，溶解后，用2mol/L氢氧化钠（约18mL）调节pH至7.60，加水稀释至 250mL。或取17.5g三乙醇胺，加水约200mL，加盐酸4mL，混匀，加3.7g乙二胺四乙酸二钠，溶解后，用2mol/L氢氧化钠溶液或2mol/L盐酸溶液调节pH至7.6，加水稀释至250mL。过滤后4℃保存，一周内使用。 5.2.2.2复合酶溶液：取固体复合酶0.1g加盐酸三乙醇胺缓冲液（pH7.6)溶解并稀释至10mL。重熔漏斗过滤，4℃下保存。 5.2.2.3还原型辅酶I溶液：取还原型辅酶I6.5mg，加盐酸三乙醇胺缓冲液溶解，并稀释至50mL。
2 GB/T 32226—2015
5.2.2.4果糖二磷酸钠溶液：取果糖二磷酸钠0.3g（按无水物计算），用水溶解并稀释至10mL。 5.2.3仪器和设备
紫外-可见分光光度法应符合GB/T9721的规定。 5.2.4分析步骤
取两只石英吸收皿，一只加2.99mL还原型辅酶I溶液和10μL果糖二磷酸钠溶液，作为样品池；另一只加2.99mL盐酸三乙醇胺缓冲液和10μL果糖二磷酸钠溶液，作为空白池，摇匀，静置5min，在 340nm波长处测定吸光度。向样品池中加人40uL复合酶溶液，在20℃～25℃立即摇匀并准确记时，于1min，2min，3min，4min，5min分别测定吸光度，以时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，取近似直线部分的斜率（即平均每分钟吸收度的差值△A）。重复测定2次，取平均值。
固体复合酶的活力按式（1)计算：
6.29×10×3× 406.06
AA
X1000
2
...(1)
X=.
W
式中： X AA 3 406.06 1000 6.29X103 -还原型辅酶I（DPNH)的摩尔吸收系数；
固体复合酶的活力，单位为微克每毫克（μg/mg）；平均每min吸收度的差值；反应溶液体积，单位为毫升（mL）果糖二磷酸钠三钠盐的相对分子质量（CH：NasO12Pz）；毫克转化为微克，单位为微克（μg）；
-
果糖二磷酸钠反应系数；加人样品池中的酶溶液质量，单位为毫克（mg）。
2 W
5.3净含量
按JF1070执行。
6检验规则
6.1组批抽样
按HG/T3921的规定进行采样。 6.2出厂检验 6.2.1出厂检验项目包括外观、酶活力。 6.2.2产品出厂前，应由生产厂的质检部门负责按本标准规定逐批进行检验。符合标准要求，并签署质量合格证的产品方可出厂。 6.3型式检验 6.3.1 在出厂检验合格的成批产品中随机抽取√n+1（n表示产品数量），进行型式检验， 6.3.2 型式检验项目为全项检验，包括外观、酶活力。但有下列情况之一时，也应进行型式检验：
a）产品正常生产时，一季度进行一次； b）生产工艺、设备、原料有较大改变，可能影响产品质量时；
3 GB/T32226—2015
c) 停产半年以上，重新恢复生产时； d) 出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时； e) 国家监督机构提出型式检验要求时。
6.4判定规则
抽取样品经检验，所检项目全部合格，则判该批产品为合格品；如果在检验中结果有一项指标不符合标准时，允许在同批产品中两倍量重新抽样，如复检结果仍有一项不合格者则判该批产品为不合格品。
7标志、包装、运输和存
7.1标志
本产品的包装、标志按GB15346的规定执行。 7.2包装
内包装采用棕色或白色密封玻璃瓶。净含量为0.1g；0.2g；0.3g;0.5g；1g。外包装采用密封塑料盒。复合酶（ALD、TIM、GDH)试剂包装瓶上应贴标签，并注明：型号、批号、生产日期、净含量、保质期、 厂名厂址、电话、邮编及使用方法。 7.3运输
运输时不得与有害物质混放、混运，不得重压，低温避光，控制温度在4℃以下。 7.4贮存
贮存于一20℃。本产品自生产之日起，保质期为18个月。
4 GB/T32226—2015
附录A （资料性附录）
固体复合酶（ALD、TIM、GDH)试剂含量测定使用说明
A.1试剂
A.1.1空白酶溶液
取固体复合酶（活力应符合规定）60mg，用盐酸三乙醇胺缓冲液溶解并稀释至20mL，垂熔漏斗过滤，4℃保存，两天内使用。 A.1.2 测定酶溶液
取10mL空白酶溶液，加3.0mg还原型辅酶I（NADH），溶解后4C保存，两天内使用。
A.2 供试品溶液的制备
取复合酶适量，精确称定，加水溶解。制成每毫升（mL)约含0.4mg（按无水物计算）的溶液。
A.3测定方法
精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液2mL，测定酶溶液1mL，置石英吸收池中；另精密量取上述缓冲液 2mL，空白酶溶液1mL，置另一吸收池，作为空白，摇匀，静置15min，在340nm波长处测定吸光度 A，。各池再分别加人供试品溶液0.1mL，摇匀，于20℃～25℃放置10min，在340nm波长处测定，直至吸光度基本不变，读取吸光度A2。求出吸光度差值（△A）（△A=A，一1.0333A，）。果糖二磷酸钠含量按式(A.1)计算：
× 3.0 ×406.06 ×n × 100% ...
AA
X=6 6.29×10*×2 果糖二磷酸钠含量，%；吸光度差值；加人供试品溶液前样品池中溶液的体积，单位为毫升（mL）；果糖二磷酸三钠盐的相对分子质量（CsHNaaOi2P2）；
..(A.1 )
0.1XW
式中： X △A 3.0 406.06 n 6.29×103 还原型辅酶I（NADH)的摩尔吸收系数；
稀释倍数；
果糖二磷酸钠反应系数；供试品溶液加人体积，单位为毫升（mL）；供试品的取样量（以无水物计算），单位为毫克（mg）。
2 0.1 W
A.4测试范围
适用于： a）注射用果糖二磷酸钠；
5 GB/T 32226—2015
b) 果糖二磷酸钠注射液； c) 果糖二磷酸钠片； d) 果糖二磷酸钠胶囊： e) 果糖二磷酸钠口服溶液； f) 果糖二磷酸钠类产品。
A.5 注意事项
上述操作在室温20℃～25℃为宜。
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