ICS 71.040.40;13.060.70 G 76
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T26322—2010
工业循环冷却水中亚硝化菌的测定
MPN 法
Examination of nitrite bacteria in industrial circulating cooling water--
MPN test
2011-01-04发布
2011-12-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
发布 GB/T26322—2010
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出。 本标准由全国化学标准化技术委员会水处理剂分会（SAC/TC63/SC5)归口。 本标准负责起草单位：中海油天津化工研究设计院、广州市特种承压设备检测研究院本标准主要起草人：张全、李琳、黎华、滕厚开、杜玉辉。
I GB/T26322—2010
4. 15 医用脱脂纱布。 4.16 医用脱脂棉。
5仪器、设备
5.1无菌箱（室）或超净工作台。 5.2蒸汽压力灭菌器。 5.3生化培养箱。 5.4电热干燥箱：温度可控制在60℃～280℃。 5.5刻度吸管：1mL。 5.6刻度吸管：10mL。 5.7试管：d20mmX200mm. 5.8试管架。 5.9磨口试剂瓶：1000mL。 5.10 容量瓶：1000mL。 5.11 塘瓷量杯：1000mL， 5.12 白色比色瓷板。
6试验前准备
6.1无菌稀释水的制备 6.1.1生理盐水的配制：称取8.5g氯化钠，溶解在1000mL水中，混匀。 6.1.2将生理盐水分装在d20mm×200mm的试管中，每管9mL，塞上棉塞，用牛皮纸把试管口包好，用蒸汽压力灭菌器于（121土1）℃灭菌15min～30min。 6.2富集培养基的制备
称取下列试剂：硫酸铵磷酸二氢钠 NaH2PO,
2.0 g; 0.25 g; 0.75 g; 5.0 g;
(NH)2SO4
K,HPO. CaCO: MnSO,:4H,0 0.01 g;
磷酸氢二钾碳酸钙硫酸锰硫酸镁将上述试剂加水约950mL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于塘瓷量杯中。
0.03 g.
MgSO4:7H20
用热水补充至1000mL，用氢氧化钠溶液调节pH值至7.0~7.2，并分装在d20mm×200mm的试管中，每管10mL，塞上棉塞，用牛皮纸把管口包好。十个一捆，用蒸汽压力灭菌器于（121土1）℃灭菌 15min~30min。 6.3指示剂的制备
格里斯氏(Griess)试剂 A液：对氨基苯磺酸0.5g，乙酸溶液（10%）150mL，保存在棕色瓶中。 B液：α-胺0.1g，水20mL，乙酸溶液（10%)150mL，保存在棕色瓶中。
2 GB/T26322—2010
表 1
稀释度、生长情况及阳性试管数 10-1
报告方式个/mL
示例
阳性组合指数
10-2
10-3
10-4
10° +++++ +++++
y
520
5.0/101=50
1
5
5
2
0
0
++++:
+
+ -
+
25/10°=25
542
2
5 +++++ 十十+
2
0
4
0
X
+
532
14/10°=14
3
1
5
3
1
0
3.5/102 3.5×102
+++++ +++++ +++++ +
510
4
5
10
L)
1
0
9 精密度
9.1由于微生物是不稳定的，精确的试验不能实现，精密度表达仅能按MPN程序。 9.2在样品中细菌的分布是不规则的，有时细菌成倍地吸附到小颗粒上，MPN正确度随着平行管的增加而增加，当使用5个平行管时，每管加1mL样品时测定结果的置信度为95%。 GB/T26322—2010
附录A （规范性附录）
五个平行管最大可能的菌数
表A.1规定了五个平行管最大可能的菌数。
表A.1
个/mL 指数 1. 2
个/mL 8. 5 5. 0 7. 0 9. 5 12. 0 15. 0 17. 5 8. 0 11. 0 14. 0 17. 0 20. 0 25.0 13. 0 17. 0 25. 0 30. 0 35. 0 45. 0 25, 0 35. 0 60. 0 90. 0 160.0 180.0
指数 203 210 211 212 220 221 222 230 231 240 300 301 302 310 311 312 313 320 321 322 330 331 340 341 350
个/mL 1. 3 1. 7 2. 0 2. 5 1. 7 2. 0 2. 5 2. 0 2. 5 3. 0 2. 5 3. 0 4. 0 3. 5 4. 9 4. 0 4. 0 2. 5 3. 0 4. 0 6. 0 7. 5 3. 5 4. 5 6. 0
指数 513 520 521 522 523 524 525 530 531 532 533 534 535 540 541 542 543 544 545 550 551 552 553 554 555
指数 000 001 002 010 011 012 020 021 030 100 101 102 103 110 111 112 120 121 122 130 131 141 200 201 202
个/mL 0. 0 0. 2 0. 4 0. 2 0. 4 0. 6 0. 4 0. 6 0. 6 0. 2 0. 4 0. 6 0. 8 0. 4 0. 6 0. 8 0. 6 0. 8 1. 0 0. 8 1. 0 1. 1 0. 5 0. 7 0. 9
400 401 402 403 410 411 412 420 421 422 430 431 432 440 441 450 451 500 501 502 503 504 510 511 512
0. 7 0. 9 1. 2 0. 9 1. 2 1. 4 1. 2 1. 4 1. 4 0. 8 1. 1 1. 4 1. 1 1. 4 1. 7 2. 0 1. 4 1. 7 2. 0 1. 7 2. 0 2. 0 2. 5 2. 5
5 GB/T 26322—2010
附 录 B （规范性附录）
四个平行管最大可能的菌数
表B.1规定了四个平行管最大可能的菌数。
表 B. 1
指数 000 001 002 003 010 011 012 013 020 021 022 030 031 040 041 100 101 102 103 110 111 112
个/mL 0. 0 0. 2 0. 5 0. 7 0. 2 0. 5 0. 7 0. 9 0. 5 0. 7 0. 9 0. 7 0. 9 0. 9 1. 2 0. 3 0. 5 0. 8 1. 0 0. 5 0. 8 1. 0
指数 113 120 121 122 123 130 131 132 140 141 200 201 202 203 210 211 212 213 220 221 222 230
指数 231 240 241 300 301 302 303 310 311 312 313 320 321 322 330 331 332 333 340 341 400 401
个/mL 2. 0 2. 0 3. 0 1. 1 1. 6 2. 0 2. 5 1. 6 2. 0 3. 0 3. 5 2. 0 3. 0 3. 5 3. 0 3. 5 4. 0 5. 0 3. 5 4. 5 2. 5 3. 5
指数 402 403 410 411 412 413 414 420 421 422 423 424 430 431 432 433 434 440 441 442 443 444
个/mL 5. 0 7. 0 3. 5 5. 5 8. 0 11. 0 14. 0 6. 0 9. 5 13. 0 17. 0 20. 0 11. 5 16. 5 20. 0 30. 0 35. 0 25. 0 40. 0 70. 0 140.0 160.0
个/mL 1. 3 0. 8 1. 1 1. 3 1. 6 1. 1 1. 4 1. 6 1. 4 1. 7 0. 6 0. 9 1. 2 1. 6 0. 9 1. 3 1. 6 2. 0 1. 3 1. 6 2. 0 1. 7
6 ICS 71.040.40;13.060.70 G 76
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T26322—2010
工业循环冷却水中亚硝化菌的测定
MPN 法
Examination of nitrite bacteria in industrial circulating cooling water--
MPN test
2011-01-04发布
2011-12-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
发布 GB/T26322—2010
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出。 本标准由全国化学标准化技术委员会水处理剂分会（SAC/TC63/SC5)归口。 本标准负责起草单位：中海油天津化工研究设计院、广州市特种承压设备检测研究院本标准主要起草人：张全、李琳、黎华、滕厚开、杜玉辉。
I GB/T26322—2010
4. 15 医用脱脂纱布。 4.16 医用脱脂棉。
5仪器、设备
5.1无菌箱（室）或超净工作台。 5.2蒸汽压力灭菌器。 5.3生化培养箱。 5.4电热干燥箱：温度可控制在60℃～280℃。 5.5刻度吸管：1mL。 5.6刻度吸管：10mL。 5.7试管：d20mmX200mm. 5.8试管架。 5.9磨口试剂瓶：1000mL。 5.10 容量瓶：1000mL。 5.11 塘瓷量杯：1000mL， 5.12 白色比色瓷板。
6试验前准备
6.1无菌稀释水的制备 6.1.1生理盐水的配制：称取8.5g氯化钠，溶解在1000mL水中，混匀。 6.1.2将生理盐水分装在d20mm×200mm的试管中，每管9mL，塞上棉塞，用牛皮纸把试管口包好，用蒸汽压力灭菌器于（121土1）℃灭菌15min～30min。 6.2富集培养基的制备
称取下列试剂：硫酸铵磷酸二氢钠 NaH2PO,
2.0 g; 0.25 g; 0.75 g; 5.0 g;
(NH)2SO4
K,HPO. CaCO: MnSO,:4H,0 0.01 g;
磷酸氢二钾碳酸钙硫酸锰硫酸镁将上述试剂加水约950mL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于塘瓷量杯中。
0.03 g.
MgSO4:7H20
用热水补充至1000mL，用氢氧化钠溶液调节pH值至7.0~7.2，并分装在d20mm×200mm的试管中，每管10mL，塞上棉塞，用牛皮纸把管口包好。十个一捆，用蒸汽压力灭菌器于（121土1）℃灭菌 15min~30min。 6.3指示剂的制备
格里斯氏(Griess)试剂 A液：对氨基苯磺酸0.5g，乙酸溶液（10%）150mL，保存在棕色瓶中。 B液：α-胺0.1g，水20mL，乙酸溶液（10%)150mL，保存在棕色瓶中。
2 GB/T26322—2010
表 1
稀释度、生长情况及阳性试管数 10-1
报告方式个/mL
示例
阳性组合指数
10-2
10-3
10-4
10° +++++ +++++
y
520
5.0/101=50
1
5
5
2
0
0
++++:
+
+ -
+
25/10°=25
542
2
5 +++++ 十十+
2
0
4
0
X
+
532
14/10°=14
3
1
5
3
1
0
3.5/102 3.5×102
+++++ +++++ +++++ +
510
4
5
10
L)
1
0
9 精密度
9.1由于微生物是不稳定的，精确的试验不能实现，精密度表达仅能按MPN程序。 9.2在样品中细菌的分布是不规则的，有时细菌成倍地吸附到小颗粒上，MPN正确度随着平行管的增加而增加，当使用5个平行管时，每管加1mL样品时测定结果的置信度为95%。 GB/T26322—2010
附录A （规范性附录）
五个平行管最大可能的菌数
表A.1规定了五个平行管最大可能的菌数。
表A.1
个/mL 指数 1. 2
个/mL 8. 5 5. 0 7. 0 9. 5 12. 0 15. 0 17. 5 8. 0 11. 0 14. 0 17. 0 20. 0 25.0 13. 0 17. 0 25. 0 30. 0 35. 0 45. 0 25, 0 35. 0 60. 0 90. 0 160.0 180.0
指数 203 210 211 212 220 221 222 230 231 240 300 301 302 310 311 312 313 320 321 322 330 331 340 341 350
个/mL 1. 3 1. 7 2. 0 2. 5 1. 7 2. 0 2. 5 2. 0 2. 5 3. 0 2. 5 3. 0 4. 0 3. 5 4. 9 4. 0 4. 0 2. 5 3. 0 4. 0 6. 0 7. 5 3. 5 4. 5 6. 0
指数 513 520 521 522 523 524 525 530 531 532 533 534 535 540 541 542 543 544 545 550 551 552 553 554 555
指数 000 001 002 010 011 012 020 021 030 100 101 102 103 110 111 112 120 121 122 130 131 141 200 201 202
个/mL 0. 0 0. 2 0. 4 0. 2 0. 4 0. 6 0. 4 0. 6 0. 6 0. 2 0. 4 0. 6 0. 8 0. 4 0. 6 0. 8 0. 6 0. 8 1. 0 0. 8 1. 0 1. 1 0. 5 0. 7 0. 9
400 401 402 403 410 411 412 420 421 422 430 431 432 440 441 450 451 500 501 502 503 504 510 511 512
0. 7 0. 9 1. 2 0. 9 1. 2 1. 4 1. 2 1. 4 1. 4 0. 8 1. 1 1. 4 1. 1 1. 4 1. 7 2. 0 1. 4 1. 7 2. 0 1. 7 2. 0 2. 0 2. 5 2. 5
5 GB/T 26322—2010
附 录 B （规范性附录）
四个平行管最大可能的菌数
表B.1规定了四个平行管最大可能的菌数。
表 B. 1
指数 000 001 002 003 010 011 012 013 020 021 022 030 031 040 041 100 101 102 103 110 111 112
个/mL 0. 0 0. 2 0. 5 0. 7 0. 2 0. 5 0. 7 0. 9 0. 5 0. 7 0. 9 0. 7 0. 9 0. 9 1. 2 0. 3 0. 5 0. 8 1. 0 0. 5 0. 8 1. 0
指数 113 120 121 122 123 130 131 132 140 141 200 201 202 203 210 211 212 213 220 221 222 230
指数 231 240 241 300 301 302 303 310 311 312 313 320 321 322 330 331 332 333 340 341 400 401
个/mL 2. 0 2. 0 3. 0 1. 1 1. 6 2. 0 2. 5 1. 6 2. 0 3. 0 3. 5 2. 0 3. 0 3. 5 3. 0 3. 5 4. 0 5. 0 3. 5 4. 5 2. 5 3. 5
指数 402 403 410 411 412 413 414 420 421 422 423 424 430 431 432 433 434 440 441 442 443 444
个/mL 5. 0 7. 0 3. 5 5. 5 8. 0 11. 0 14. 0 6. 0 9. 5 13. 0 17. 0 20. 0 11. 5 16. 5 20. 0 30. 0 35. 0 25. 0 40. 0 70. 0 140.0 160.0
个/mL 1. 3 0. 8 1. 1 1. 3 1. 6 1. 1 1. 4 1. 6 1. 4 1. 7 0. 6 0. 9 1. 2 1. 6 0. 9 1. 3 1. 6 2. 0 1. 3 1. 6 2. 0 1. 7
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